鉴于PD-1在慢性淋巴细胞白血病（CLL）中介导免疫抑制的既定作用，我们测试并报告了PD-1阻断抗体pembrolizumab在复发和转化的CLL患者中的疗效。观察到pembrolizumab在RT患者中的选择性反应（~40%），特别是在之前的伊布替尼之后（Ding, Blood, 129:3419）。相关分析显示，在伊布替尼治疗进展后，RT和侵袭性CLL患者的肿瘤B细胞中PD-1表达。PD-1是表达在CLL T细胞上的一种抑制性受体，通过与其配体的相互作用抑制免疫突触和细胞毒性T细胞功能。然而，PD-1在肿瘤B细胞中的表达模式和作用尚不明确。在这项研究中，我们研究了PD-1信号轴在CLL和RT患者的B细胞病理学中的功能含义。
通过免疫组化法（小鼠克隆NAT105，Abcam）检测26个CLL累及的淋巴结（LN）和20个RT累及的LN的PD-1表达。在体外研究中，我们通过流式细胞仪和Western blot（WB）分析检查了11个淋巴瘤细胞系和1个CLL细胞系的PD-1表达。使用CRISPR/Cas9系统（Addgene）敲除PD-1和使用pLEX-慢病毒（Thermoscientific）或pRetro-逆转录病毒（Clonetech）系统过度表达PD-1的效果，通过Western blot分析评估了促生存和凋亡信号通路。CLL和RT患者的基因表达特征也通过基于Illumina的RNA测序进行评估，使用的是临床活检获得的FFPE-结节组织。
与CLL-LN相比，RT-LN中PD-1的表达明显增加。(RT与CLL的平均值±SEM，30.6±4.7 vs. 11.5±2.8，P < 0.001)。PD-1的表达在RT患者中是最高的，因为他们之前的CLL治疗是依鲁替尼（图1A）。在所有测试PD-1表达的细胞系中，通过WB和flow测试PD-1的表达在Mino（套细胞淋巴瘤系）中最高，其次是Jvm2（B-PLL系）和Mec1（CLL系）的中度表达，Jeko-1（B-NHL系）和淋巴瘤系’Karpas299’都是非常低水平的表达。CRISPR/Cas9介导的Mino细胞中PD-1的耗竭抑制了构成性活跃的Akt、p70S6K和mTOR途径，并伴随着抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1和XIAP的明显下调，但P-ERK1/2不受影响。构成性慢病毒（pLEX-PD-1）介导的PD-1在Jeko-1中的过表达和多西环素调节的诱导性逆转录病毒（pRetro-PD-1）介导的PD-1在Karpas299中的过表达激活了Akt、mTOR和p70S6K途径。PD-1在Jeko-1中的过表达明显增加了Bcl-2和Mcl-1，在Karpas299中则增加了Bcl-2、Mcl-1和XIAP的表达（图1B）。使用RNA测序对5个由RT或进展期CLL涉及的结节组织进行了平行的遗传分析，这些患者在先前的伊布替尼治疗后出现了临床进展。在所有5名患者中，无论检测到何种基因突变（包括TP53、ATM、BTK、NOTCH1、XPO1、SF3B1、TET2等），PD-1的过度表达都与Bcl-2和mTOR的表达增加有关。然而，在2名先前接受化疗免疫治疗的患者中，通过RNA测序分析没有观察到类似的基因特征过表达，检测到了包括Met或NFkB过表达的替代途径。鉴于这些临床和实验室发现，我们用BTK和Bcl-2抑制剂（分别为伊布替尼和venetoclax）联合治疗了2名RT患者，他们的CLL在之前的伊布替尼治疗后发生了转化。在这两个病例中都观察到肿瘤负担的明显减轻，其中一个完全反应，一个混合反应。
在先前伊布替尼治疗后的RT患者中首次观察到PD-1、Akt/mTOR和Bcl-2基因签名的表达增加。PD-1在RT和进展期CLL患者的肿瘤B细胞中过量表达，可能调节AKT/mtOR以上调Bcl-2。除PD-1阻断外，同时靶向BTK和Bcl-2途径似乎是治疗这些侵袭性疾病的一个有希望的策略。
本文来源于互联网，如有侵权请联系删除。来源：https://ashpublications.org/blood/article/132/Supplement%201/586/263257/PD-1-Overexpression-in-Richter-s-Transformation-RT?searchresult=1
简体中文